細胞因子在體內具有重要的病理作用,在感染、炎癥、自身免疫病、免疫缺陷疾病等狀態(tài)下,部分細胞因子會(huì )明顯變化,根據這些指標可以判斷機體的免疫功能。血清、血漿或組織液中細胞因子檢測可以對疾病診斷和治療做出相應評價(jià),具有重要的應用價(jià)值。廣泛應用于細胞生物學(xué)、免疫學(xué)以及腫瘤學(xué)等領(lǐng)域的流式細胞術(shù)是細胞因子檢測的一種方法。
CBA(cytometric bead array)法是新發(fā)展起來(lái)的利用流式細胞術(shù)測定細胞因子的新方法,該方法直接檢測分泌到細胞外的處于游離狀態(tài)的細胞因子。流式細胞術(shù)不能直接檢測細胞因子,CBA技術(shù)利用人工合成的微球(如直徑為7.5µm的聚苯乙烯微球)代替細胞,在該做球上包被細胞因子抗體,當待測樣品中含有相應的細胞因子時(shí),人工微球上的抗體能夠與細胞因子結合,然后再加入PE偶聯(lián)的抗細胞因子抗體,該PE偶聯(lián)抗體就可以與微球上結合的細胞因子結合,形成“三明治夾心”結構。其基本原理與ELISA法檢測細胞因子具有相似之處,只是ELISA法利用的是酶系統,通過(guò)使底物顯色,計算顏色的深淺來(lái)定量細胞因子,而CBA能利用的是熒光系統,通過(guò)激發(fā)PE熒光素,分析熒光信號的強弱來(lái)定量細胞因子。
CBA穩定性好、可重復性高,能避免酶聯(lián)免疫放大技術(shù)使信號失真導致的假陽(yáng)性。
流式細胞術(shù)檢測用于細胞因子檢測是一種相對快速、重復性好并能準確定量的方法。但由于胞內分析步驟復雜,涉及變異因素多,可能會(huì )出現結果不穩定,較難重復等問(wèn)題。
如在檢測血清時(shí),由于血清成分復雜,細胞因子含量差距大,實(shí)驗中經(jīng)常會(huì )出現分群不明顯、微球聚集、濃度太低等現象,對實(shí)驗結果造成很大影響。如流式CBA法的微球由聚苯乙烯材料制作而成,血清加入微球之后如果沒(méi)有充分渦旋,容易沉淀聚集,細胞因子不能充分跟微球結合,導致多群甚至聚集現象發(fā)生,檢測結果將是無(wú)效的。需要從制備混合微球開(kāi)始到加入實(shí)驗管,直到上機檢測前每一步都必須充分渦旋,以避免微球發(fā)生聚集。