細胞因子在體內具有重要的病理作用,在感染、炎癥、自身免疫病、免疫缺陷疾病等狀態(tài)下,部分細胞因子會(huì )明顯變化,根據這些指標可以判斷機體的免疫功能。血清、血漿或組織液中細胞因子檢測可以對疾病診斷和治療做出相應評價(jià),具有重要的應用價(jià)值。廣泛應用于細胞生物學(xué)、免疫學(xué)以及腫瘤學(xué)等領(lǐng)域的流式細胞術(shù)是細胞因子檢測的一種方法。
由于血清、細胞培養上清、積液中的細胞因子含量低,不容易檢測,加上樣本數量少,傳統的方法無(wú)法滿(mǎn)足多因子檢測。流式微球捕獲芯片技術(shù)(CBA)微量樣本多重蛋白定量技術(shù),是用流式細胞儀對多重蛋白進(jìn)行定量檢測的方法,能夠同時(shí)對樣本中的多個(gè)指標進(jìn)行定性、定量檢測,可用于細胞因子檢測。
流式細胞儀技術(shù)(FCM)技術(shù)可以應用流式細胞儀,結合單克隆抗體技術(shù)、免疫熒光染色技術(shù),對快速流動(dòng)液體中的單細胞進(jìn)行多種參數測量和分析。CBA檢測系統采用聚苯乙/烯熒光微球連結特定的捕獲抗體,捕捉待測物,同時(shí)再加入待測物的熒光抗體,三者形成夾心復合物,通過(guò)流式細胞儀進(jìn)行檢測。流式細胞術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是同時(shí)可以進(jìn)行多參數檢測,快速并且信息量大。
流式細胞術(shù)檢測用于細胞因子檢測是一種相對快速、重復性好并能準確定量的方法。但由于胞內分析步驟復雜,涉及變異因素多,可能會(huì )出現結果不穩定,較難重復等問(wèn)題。
如在檢測血清時(shí),由于血清成分復雜,細胞因子含量差距大,實(shí)驗中經(jīng)常會(huì )出現分群不明顯、微球聚集、濃度太低等現象,對實(shí)驗結果造成很大影響。如流式CBA法的微球由聚苯乙/烯材料制作而成,血清加入微球之后如果沒(méi)有充分渦旋,容易沉淀聚集,細胞因子不能充分跟微球結合,導致多群甚至聚集現象發(fā)生,檢測結果將是無(wú)效的。需要從制備混合微球開(kāi)始到加入實(shí)驗管,直到上機檢測前每一步都必須充分渦旋,以避免微球發(fā)生聚集。